科研团队目前研究围绕着乙型肝炎重症化基础和临床研究、基于CRISPR技术研发传染病病毒快速检测方面开展系列研究。团队成员包括任锋教授和张向颖副教授。

     1、乙型肝炎慢性化、重症化临床和基础研究

     乙型肝炎重症化导致的慢加急性肝衰竭（Acute-on-Chronic Liver Failure，ACLF, 以前称为重型肝炎肝衰竭）因病情危重、发展迅速、病死率高，严重威胁着我国乙肝患者的生命和健康。虽然近年临床诊疗手段不断增加，但仍不能从根本上改变ACLF病情危重、进展迅速的现状。因此，迫切需要从更深层次、更新角度探讨乙型肝炎重症化的发病机制。

      1.1深入揭示了乙型肝炎慢性化、重症化发生的最新分子机制

       国内首次利用蛋白质组学方法，发现并系统的探讨了细胞信号分子糖原合成酶激酶3β（GSK3β）在肝衰竭致病机制中的作用及分子调控机制，发现抑制GSK3β活性通过抑制炎症反应显著改善ALF小鼠模型肝损伤，揭示了GSK3β活性升高促进了ALF发生、发展，为ALF治疗提供了一个新的靶点。鉴于以上重要发现，我们的研究结果发表在肝病领域最高影响力的Hepatology杂志和PLoS One国际知名杂志上发表。以上创新性结果分别在2009年第15届世界肝脏移植年会（美国纽约）和2012年第14届国际病毒性肝炎和肝病大会（中国上海），在大会上发言。

       国内最早深入探究内质网应激（ERS）在乙肝相关肝衰竭致病过程中的关键作用，揭示了ERS诱导的保护基因在慢性乙肝过程中被激活，而在ACLF过程中被抑制，同时ERS诱导的凋亡基因被激活。并且ERS通过协同炎症反应和肝细胞调亡而对ACLF发生发展发挥着促进作用。因此ACLF是导致ERS产生的原因，而后者则是引起ACLF的主要机制。这些对加深ACLF致病分子机制理解、创新药物开发具有重要意义。鉴于以上重要发现，我们的研究结果发表在SCI文章8篇，中华系列文章19余篇。以上创新性结果在2010年第16届世界肝脏移植年会（中国香港）获得Travel Award，并分别在大会上进行发言；在2013第19届世界肝脏移植年会（澳大利亚悉尼）、2014年亚太肝病年会HBV高峰（中国广州）论坛以及2019年美国肝病年会（美国旧金山）上进行大会发言并获得奖项；

       国内首次深入揭示了细胞自噬在乙肝相关肝衰竭致病机制中发挥着保护作用，并进一步探究了GSK3β－PPARα－细胞自噬信号通路在肝衰竭致病机制中的重要作用。首次深入探究细胞自噬在肝衰竭致病过程中的作用，发现自噬的激活在慢性乙肝期间促进HBV病毒的复制，而在ACLF肝损伤过程中又发挥着显著的保护作用；随后又明确了GSK3β介导PPARα而调控细胞自噬，从而促进急性肝衰竭疾病进展中的作用，为其致病机制研究开展了新的方向。这项研究在国内外均具有首创性；鉴于以上重要发现，我们的研究结果分别于2014和2016年在Cell death ＆disease 杂志上发表SCI文章2篇，中华系列文章5篇。以上创新性发现受到了国际肝病知名专家的认可，在一系列国际会议上进行学术交流并获奖，分别在2016年第22届世界肝脏移植年会（韩国首尔）和2018年第28届亚太肝病年会（印度满德里）进行了大会发言。

      1.2发现和验证了能够对ACLF早期预警和预后判断的生物标志物——内质网应激相关指标和microRNAs

ACLF疗效差的原因包括其突发性和不可预测性。若能早期预警，在仅仅出现ACLF肝衰竭病变趋势时即给予积极处理，则有机会通过临床干预防治疾病的发生和发展。因此，ACLF早期预警方法的研究，对提高治愈率，减少死亡率就显得尤为重要。

       首次明确了不同严重程度内质网应激在ACLF预警和预后中的作用，内质网应激相关标志物在乙型肝炎重症化过程中的表达程度，找出了这些标志物与乙型肝炎重症化疾病进展的变化规律和相关性，从而为早期预警慢性乙肝进展为ACLF提供了可能；此外，明确了内质网应激相关标志物在ACLF不同预后中表达的变化规律和相关性，从而可以对ACLF的不同预后进行推断。以上研究证实了内质网应激不同指标在ACLF早期预警和预后判断的关键作用。

      首次建立高通量、高灵敏、高特异、高效率的microRNA表达谱SmartRNAplexTM检测方法，并利用我院特有的乙型肝炎重症化标本库，选取慢性乙型肝炎患者和ACLF患者以及ACLF不同分期（早、中、晚期）的临床病例进行大规模的筛选和验证，并结合临床表现和实验室检查结果，分别建立能够反应ACLF早期预警的microRNA表达谱模型。深入研究了microRNAs监测在慢性乙型肝炎引起ACLF早期预警中的作用，最终为危害我国人民健康的顽疾之一的ACLF早期发现和早期治疗提供新的机会。

       2、基于CRISPR技术的传染病病原体检测平台的建立

       2.1基于CRISPR新技术建立HBV cccDNA检测新方法以及试剂盒的研发

       慢性乙型肝炎难以治愈的关键因素是未能彻底清除的共价、闭合、环状DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA），其是HBV复制产生的所有RNA和子代病毒合成的模板，可以在肝细胞核内持续、稳定地存在，目前现有的抗病毒药均不能清除，故HBV cccDNA的存在被认为是HBV感染慢性化及抗HBV治疗停止后肝炎复发最主要原因。HBV cccDNA的存在具有以下特点：①患者肝脏中的水平极低，每个肝细胞内只有约5～50个拷贝，对检测方法的灵敏度提出了较高要求；②乙肝病毒双链DNA（relaxed circular DNA，rcDNA）分子与cccDNA序列的高度同源性，因此检测方法也必须具备较高的特异性。因此，高灵敏性、高特异性HBV cccDNA的检测方法对深入研究HBV 致病机制、评价乙肝患者药物疗效等方面具有重要意义。

       首次建立基于CRISPR/Cas技术的高灵敏性、高特异性的HBV cccDNA检测新方法并初步形成了有利于转化的试剂盒。CRISPR/Cas技术不仅具有强大的基因编辑能力，更重要的是其在分子诊断更具有重要的应用价值。我们采用RCA技术和PCR技术与CRISPR-Cas13a新技术的结合，极大的提高检测的灵敏性，可以实现单拷贝基因的核酸检测，这对于肝组织、全血甚至血浆中微量水平的HBV cccDNA检测具有显著的临床意义；我们采用酶处理待测样本消化线性DNA、设计跨越两个缺口的引物以外，还充分利用CRISPR-Cas13a的特性来设计高特异性的crRNA与HBV cccDNA进行匹配，因此极大的提高检测的特异性。

       目前申请3项国家发明专利，包括：基于PCR-CRISPR/Cas13a检测乙肝肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒（专利申请号：201910716750.1）；一种基于RAA-CRISPR-cas13a检测HBV cccDNA的试剂盒（专利申请号：202010195047.3）一种基于RCA-PCR-CRISPR-cas13a检测HBV cccDNA的试剂盒（专利申请号：202110200329.2）。

        2.2基于CRISPR新技术建立HBV检测新方法以及快速检测免疫试纸的研发

       目前针对 HBV 最常用的检测为血清学检测，检测指标主要包括 HBsAg、抗-HBs 、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc 即通常所指的乙肝五项，通过免疫学方法（如酶联免疫吸附试验等）进行检测。然而，由于临床上常常存在感染窗口期、抗原表位突变、血清学转换等情况，加之免疫学检测方法灵敏度较低，对 HBV血清标记物的免疫学检测目前无法有效检出对部分情况下的乙肝病毒感染。

       首次建立基于CRISPR/Cas技术的高灵敏性、高特异性和快速的HBV快速检测新方法并初步形成了有利于转化的试剂盒。我们所建立的HBV病毒检测方法不依赖于传统的核酸提取设备和PCR扩增仪器，患者血液样本裂解后即可进行RPA反应，且在等温37℃时即可完成全部反应，反应时间在60-90min中，因此HBV DNA检测新方法操作具有简单、快速的特点。此外，我们本研究充分利用RPA技术与CRISPR-Cas13a新技术的结合，以及利用CRISPR-Cas13a的特性来设计高特异性的crRNA与HBV DNA进行匹配等方法，因此具有较好的灵敏性和特异性。

（一）主持科研项目

1.     首都卫生发展科研专项重点攻关项目、首发2021-1G-2181，基于CRISPR/Cas新技术联合智能手机生物传感器技术的新型冠状病毒及其变异株多重核酸检测方法的建立及临床应用、2021.03-2021.12、200万元、在研、参与。

2.     首都卫生发展科研专项重点攻关项目、首发2020-1-1151，基于CRISPR新技术建立HBVcccDNA检测新方法及其临床应用研究、2020.01-2022.12、70万元、在研、主持。

3.     北京自然科学基金和北京市教委联合资助重点项目、KZ202010025035、基于CRISPR 新技术建立 HBV cccDNA检测新方法及临床应用研究、2020.01-2022.12、80万元、在研、主持。

4.     北京市科技计划 “首都临床诊疗技术研究及示范应用”专项课题、Z191100006619096、Z191100006619097、基于 CRISPR 新技术建立 HBV 相关检测新方法及临床应用研究、2020.01-2022.12、120万、在研、主持。

5.     国家自然科学基金面上项目、81770611、基于PPARα信号分子探讨慢加急性肝衰竭发病过程中内质网应激功能转换的分子调控机制、2018.01-2021.12、56万、在研、结题。

6.     国家“13.5”科技重大专项，2018ZX103002205-004-004，乙肝相关肝癌精准诊疗标志物的研发与转化（任务级课题）、2018.01-2020.12、278.3万元（104.18）、在研、主持。

7.     国家“13.5”科技重大专项、2018ZX10301407-005-002、基于CRISPR技术的重大传染病防控前沿技术研究（任务级课题）、2018.01-2020.12、93.11万元，在研、主持。

8.     中国肝炎防治基金会天晴肝病研究基金、TQGB20180213、基于细胞自噬探讨HBV DNA高水平孕妇母婴阻断失败的机制研究、2018.01-2019.12、5万元、在研、主持。

9.     北京市科技计划首都临床特色应用研究，Z161100000516113，慢加急性肝衰竭早期预警新方法研究——microRNA表达谱模型的建立，2016/07-2019/06，24万元、已结题、主持。

10.   北京自然科学基金面上项目，7162085，GSK3β介导PPARα信号分子在急性肝衰竭肝损伤炎症免疫机制中的作用，2016/01-2018/12，18万元、已结题、主持。

11.   国家自然科学基金面上项目、81270532、GSK3β介导自噬在重型肝炎肝衰竭疾病进展中的作用及机制、2013.01-2016.12、70万、已结题、主持。

12.   北京市科技计划首都临床特色应用研究、Z121107001012167、乙型肝炎重症化早期预警新方法研究—内质网应激检测、2012.07-2015.09、23万、已结题、主持。

13.   北京市留学人员科技活动择优资助、2012年度、细胞自噬在重型肝炎肝衰竭中的关键作用（优秀类）、2012.01-2013.12、10万、已结题、主持。

14.   人力资源和社会保障部留学人员科技活动择优资助、2012年度、细胞自噬在重型肝炎肝衰竭中的关键作用（启动类）、2012.01-2013.12、3万、已结题、主持。

15.   北京市丰台区卫生系统科学研究项目、xm111010、内质网应激在丙型肝炎致病过程中的作用及机制探讨、2011.01-2013.12，3万，已结题，主持。

16.   首都医科大学基础和临床合作项目、2011JL060、内质网应激在乙型肝炎重症化过程中的作用研究、2011.01-2013.12，、4万、已结题、主持。

17.   首都医科大学附属北京佑安医院、中国初级保健基金会项目、BJYAN-2011-023、抑制内质网应激对重型肝炎肝衰竭的保护及机制研究、2011.01-2013.12、3万、已结题，主持。

18.   中国肝炎防治基金会王宝恩肝纤维化基金会项目、CFHPC20131031、乙肝肝纤维化发生与进展新机制研究—内质网应激、2014.01-2015.12、10万、已结题、主持。

19.   中国肝炎防治基金会天晴肝病研究基金、TQGB20140253、乙型肝炎重症化早期预警新方法研究—内质网应激监测、2014.01-2015.12、1万元、已结题、主持。

（二）人才计划资助项目

1.       2022年北京市医院管理中心“登峰人才”专项资助，2022.01-2025.12。

2.       2013年北京卫生系统技术人才“学科骨干”专项资助，2013.01-2016.12。

3.       2012度北京市十百千卫生人才“百”层次人才专项资助。

4.       北京市优秀人才培养资助项目、2011D003034000022、内质网应激在丙型肝炎发病过程中的机制探讨（D类）、2011.05-2014.05、5.5万元、已结题，主持。

（三）参与重大科研项目

1.     国家“13.5”科技重大专项，重型乙型肝炎（肝衰竭）临床治疗新方案研究子课题（段钟平主持）， 2016ZX10002008_04，2016/01- 2020/12，在研，参加。

2.     国家“12.5”科技重大专项、重型乙型肝炎（肝衰竭）临床治疗新方案研究子课题（段钟平主持）、2013ZX10002002-006-001、2013.01- 2015.12、450万、在研、参加。

3.     国家“12.5”科技重大专项、北京市朝阳区艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病综合防治示范区建设研究子课题（段钟平主持）、 2012ZX10004904-003-001、2011.01-2015.12、120万、在研、参加。

4.     国家科技部973项目、建立与完善典型的乙型肝炎重症化临床研究队列及病理代谢的基础研究（段钟平主持）、2007CB512801、2007.01-2012.12、480万、已结题、参加。

5.     国家“11.5 ”科技重大专项、重型乙型肝炎病毒临床治疗新方案新方法研究子课题（段钟平主持）、2008ZX10002-005、2006.01-2010.12、1100万、已结题、参加。

（一）近5年来课题组发表的SCI文章

1.       LingXu*,Xiangying Zhang*, Yaling Cao, Zihao Fan, Yuan Tian, Huanbin Zou, Feng Ren#,Zhongping Duan#. Digital Droplet PCR (ddPCR) for Detection and Quantitation ofHepatitis Delt Virus. Clinicaland Translational Gastroenterology, accepted.

2.       GaoH*, Xu L*, Fan Z, Zhang X, Duan Z#, Ren F#.The Role of Autophagy in the Mother-to-Child Transmission of Pregnant WomenWith a High Level of HBV DNA. Front Cell Infect Microbiol. 2022 Apr22;12:850747. doi: 10.3389/fcimb.2022.850747.

3.       XiangyingZhang, Yuan Tian, Ling Xu, Zihao Fan, Yaling Cao, Yingmin Ma, Hao Li#, Feng Ren#. CRISPR/Cas13-assisted Hepatitis BVirus Covalently Closed Circular DNA Detection. Hepatology international, 2022 Apr;16(2):306-315.doi: 10.1007/s12072-022-10311-0.

4.       ZihaoFan#, Yuxian Li#, Sisi Chen, Ling Xu,Yuan Tian, Yaling Cao, Zhenzhen Pan, Xiangying Zhang,Yu Chen*, Feng Ren*. MagnesiumIsoglycyrrhizinate Ameliorates ConcanavalinA-induced Liver Injury byRegulating Autophagy. Frontiers in Pharmacology, 2022.doi.org/10.3389/fphar.2021.794319.

5.       HongGao*, Ling Xu*, Xiangying Zhang, Zhihao Fan, Hua Zhang, Zhongping Duan#,Feng Ren#,.Roles of Toll-like Receptor 3 in Intrauterine Transmission of Hepatitis B Virusin Mothers with High Viral Load. Diseases& Research, 2021, 1(1): 6-13.

6.       YuanT＃, Feng Ren＃, Ling X, Xiangying Z*. Distincteffects of different doses of kaempferol on D-GalN/LPS-induced ALF depending onthe autophagy pathway. MolecularMedicine Reports, 2021, 24: 682.

7.      Xiaohui Zhang*, Lele Guo*,Xiangying Zhang*, Ling Xu, Yuan Tian, Zihao Fan, Hongshan Wei, Jing Zhang, Feng Ren.GLT25D2Is Critical for Inflammatory Immune Response to Promoting Acetaminophen-inducedHepatotoxicity by Autophagy Pathway. Frontiers in Pharmacology, 2020. doi.org/10.3389/fphar.2020.01187.

8.       YudiGao, Yuan Tian, Xiangying Zhang XiaohuiZhang, Zhongping Duan, Feng Ren#,Yu Chen#.Magnesiumisoglycyrrhizinate ameliorates concanavalin A-induced liver injury via the MAPKpathway. Immunopharmacologyand Immunotoxicology, 2020.42(5): 445-455.

9.       LingXu*, Xiangying Zhang*, YuanTian, Zhihao Fan, Weihua Li, Mei Liu, Jianhua Hu, Zhongping Duan, Ronghua Jin#,Feng Ren#. The Critical Role of PPARα in the Binary Switchbetween Life and Death Induced by Endoplasmic Reticulum Stress. Cell Death & Disease,2020.11:621.

10.     XiangyingZhang＃, Dong Peiling＃, Lin Xu, Yuan Tian,Huayin Sun, Hongbo Shi, Zhongping Duan, Liyan Chen*, FengRen*.The different expression of caspase-1 inHBV-related liver disease and acts as a biomarker for acute-on-chronic liverfailure. BMCGastroenterology, 2019(19):148. https://doi.org/10.1186/s12876-019-1064-3.

11.     HuijuanWang＃, Liyan Chen＃, Xiangying Zhang＃, Lin Xu, Bangxiang Xie,Hongbo Shi, Zhongping Duan, Huanhu Zhang*, FengRen*. Kaempferolprotects mice from D-GalN/LPS-induced acute liver failure by regulating the ERstress-Grp78-CHOP signaling pathway.Biomedicine& Pharmacotherapy,111(2019) 468-475.

（二）近5年来课题组发表的中文文章

1.      范子豪，田原，徐玲，曹亚玲，陈思思，潘桢桢，张向颖，段钟平，任锋*.基于微滴式数字PCR技术对乙型肝炎低病毒血症患者血浆HBVDNA精准检测[J].临床检验杂志,2022,40(2):87-91.

2.      田原，张向颖，任锋*。CRISPR/Cas技术在传染病相关病原核酸检测中的应用进展。中华传染病杂志，2021，39(9)579-582。

3.       曹亚玲，任锋*。基于CRISPR/Cas技术的核酸即时检测（POCT）最新研究进展。中华检验医学杂志，2021，44(9)864-867。

4.      田原，徐玲，范子豪，曹亚玲，张向颖，陈煜，段钟平，任锋*。基于微滴数字PCR技术建立乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法。临床肝胆杂志，2021，37(8)1806-1810。

5.      张晓慧，郭乐乐，魏红山，任锋*，张晶*.糖基转移酶Colgalt2基因缺失对于对乙酰氨基酚导致的肝损伤的保护作用初探.中华肝脏病杂志，2020，28(11)108-113。

6.       张向颖，徐玲， 田原， 靳海英， 时红波， 任锋*.CHOP信号分子在PPARα激活抑制小鼠急性肝衰竭炎症反应中的作用研究. 中华肝脏病杂志，2020，28(7):613-618.

7.      徐玲，田原，张向颖，王慧娟，任锋*. 不同严重程度内质网应激对肝细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响。胃肠病与肝病学杂志，2020.29(7):799-804。

8.      徐玲，任锋*. 肝脏巨噬细胞在病毒性肝炎、酒精性和非酒精性肝损伤、肝纤维化和肝癌中的作用研究新进展 。实用肝脏病杂志，2020，23（1）：145-148。

9.      田原，任锋*.乙型肝炎病毒cccDNA检测和清除的研究进展。中华微生物学及免疫学杂志，2019，39（11）：875-879。

10.   张向颖，任锋*.内质网应激在肝衰竭发病机制中的作用。临床肝胆杂志，2019，35（9）：1920-1923.

11.   王慧娟，徐玲，田原，张向颖，时红波，陈煜，段钟平，张桓虎，任锋*. 内质网应激在乙型重型肝炎肝衰竭中的作用研究. 中华肝脏病杂志, 2019, 27(4):244-249.

12.   郭乐乐，张晓慧，张向颖，胡中杰，任锋，张晶*. 对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤对糖基转移酶Colgalt2表达的影响. 实用肝脏病杂志，2019，22（1）：29-32.

13.   王慧娟，段钟平，张桓虎*，任锋 .孕期服用抗病毒药物阻断HBV母婴传播的研究进展.临床肝胆病杂志，2018,34,(10):99-104.

14.   张晓慧，郭乐乐，刘贞利，张晶，任锋*。GLT25D2 基因在对乙酰氨基酚诱导 肝毒性损伤中对自噬的调控作用。中华危重病急救医学，2018，30（7）：45-50.

15.   王慧娟, 郭海清，张向颖，时红波，徐玲，张晶，张桓虎*，任锋*。山萘酚对HepG2细胞凋亡的影响。胃肠病学和肝病学杂志，2018，27（6）：617-622.

1.     国家发明专利：基于PCR-CRISPR/Cas13a检测乙肝肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒（专利申请号：201910716750.1）；发明人：任锋、张向颖、李浩、周育森、田原、金荣华、段钟平、陈德喜、李伟华；

2.     国家发明专利：一种基于RAA-CRISPR-cas13a检测HBVcccDNA的试剂盒（专利申请号：202010195047.3）；发明人：张向颖、任锋、李浩、周育森、田原、金荣华、段钟平、陈德喜、李伟华；

3.     国家发明专利：一种基于RCA-PCR-CRISPR-cas13a检测HBV cccDNA的试剂盒（专利申请号：202110200329.2）；发明人：任锋、张向颖、李浩、田原、段钟平、陈德喜、李伟华；

4.     国家发明专利：基于RAA-CRISPR-Cas13a技术检测乙型肝炎病毒DNA的试剂盒（专利申请号：202110200314.6）；发明人：任锋、李浩、田原、张向颖、段钟平、陈德喜、李伟华；

5.     国家发明专利申请：基于PCR-CRISPR-Cas13a检测乙型肝炎病毒前基因组RNA的试剂盒（专利申请号：202110213143.0）；发明人：任锋、徐玲、张向颖、李浩、田原、段钟平、陈德喜、李伟华；

6.     国家发明专利申请：基于数字PCR技术的丁型肝炎病毒核酸检测试剂盒（专利申请号：202110900513.8）；发明人：段钟平、任锋、张向颖；

7.     国家发明专利申请：KPC型碳青霉烯酶基因检测试剂盒（PCR-CRISPR法）、组合物及其应用（专利申请号：202111672573.5）；发明人：任锋、张向颖、曹亚玲、田原、范子豪、徐玲、高耀、马迎民、段钟平；

8.     国家发明专利申请：基于荧光定量PCR技术的丁型肝炎病毒核酸检测试剂盒（专利申请号：202210184262.2）；发明人：段钟平、任锋；